近年、先進国における抗癌性複合糖質ワクチンの製造および評価のための多くの実験が行われてきており、そしてGlobo H誘導体を用いて多くの成果が達成されている。. 現在の実験では、(Globo H)3 - ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA) - KLH抗原の新しい化学的に設計された三重バージョンが合成され、特徴付けられました。. DTPAおよびKLHタンパク質とコンジュゲートした様々な種類の癌で高度に発現される抗原性炭水化物のファミリーのメンバーである六糖である(Globo H)3-DTPA-KLHによる免疫化は、高レベルの抗体価を誘導した。マウスにおけるIL-4濃度の上昇. 免疫したマウスから採取した血清で腫瘍を治療すると、同様にヌードマウスの腫瘍サイズが減少した. 対照動物と比較して、MCF-7細胞の注射後に免疫化マウスのいずれも腫瘍増殖の徴候を示さなかった。. Globo H抗原の新たに提示された構造に基づくこれらの知見は、将来の治療用ワクチンの開発における臨床的進歩のためのエキサイティングで有望な証拠を与える. Zhuら23はMCF-7細胞の溶解とともにGlobo-KLHに対するIgGおよびIgMレベルを上昇させるために免疫系を刺激することができた。. これまでに、Globo-KLHワクチンのいくつかの誘導体が誘導および評価されています. すべての場合において、Globoの単一の多糖鎖のみが使用されているが、癌細胞表面上のGloboの外観は三本鎖である。. 最も最近提案された抗癌ワクチンの1つは、女性で最も一般的な癌である乳癌に対するワクチンです。. GloboをKLHタンパク質とコンジュゲートして、乳がんに対する体液性免疫システムに抗がん作用を示す可能性のある複合体を提供することができます。. 22 多糖類を結合させて抗癌ワクチンを製造するために提案されているタンパク質の1つは、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)タンパク質である。. 21 KLHは、大型のマルチサブユニットの酸素運搬金属タンパク質で、巨大な鍵穴リンペットの血リンパに含まれています - Megathura crenulata. これらの知見は、多糖類は免疫を誘発する可能性があるが、免疫系によって認識され免疫を提供するために結合体化される必要があることを示している. インフルエンザ菌B型の標的集団である2歳未満の小児では、破傷風毒素などの別のタンパク質と結合させる必要があるのに対し、ポリリボシルリビトールホスフェート(PRP)による免疫は2歳以上の小児に免疫を誘導する。 PRP-Tワクチンの製造.
グルカル シリアルコード ネダン20したがって、癌に対する効果的なワクチン接種はおそらく、腫瘍細胞に対する強い免疫と体内でのそれらの確立を提供するために腫瘍特異的複合糖質を必要とする. 9 腫瘍の重症度を軽減するために、腫瘍細胞表面の炭水化物抗原に対する抗体の産生を調べるために、いくつかの前臨床試験が実施されています. 10,11多くの臨床実験は、モノクローナル抗体を処方することが臨床的に有効であることを示しました. 細胞表面の抗原、特に炭水化物抗原に対する自然放出抗体は、さまざまな臨床段階における新しい癌治療法の開発と密接な関係を持っています. これまでのところ、多糖複合体に対する免疫は効果的であるが、多糖単独に対する免疫は効果的ではないことを様々な研究が示している。. 17〜19歳 免疫系が癌細胞に反応するのに理想的な時期は、癌細胞の残骸を同定し殺すために抗癌ワクチンが免疫系を訓練することができる手術および化学療法期間の直後の時間であり得ることが示唆されている。. 6腫瘍細胞を血液やリンパ系から除外し、微小転移細胞を殺すのに十分な抗体価が抗原に対して生じると、癌患者の治癒方法に顕著な変化が現れるでしょう。. 通常、免疫系は癌細胞を体内の正常な細胞と見なし、それらを危険または異物と見なしません。. 癌細胞は、それらが隠れるのを助ける正常な自己抗原を運んでいるだけでなく、免疫系によって認識された後でさえそれらが逃げることを可能にする活性化された抗癌免疫応答を抑制し得る. 5最近の研究は、炭水化物が腫瘍悪性腫瘍を引き起こすことにおいて明白で否定できない役割を持つことを示しました. 腫瘍細胞表面の炭水化物は通常、糖タンパク質、粘液分泌物、およびスフィンゴ糖脂質として存在する. 彼らの調査結果は、癌性因子および最終的には癌に対する推定免疫および免疫応答を示した. 6近年、抗がん複合糖質ワクチンの製造と評価のために多くの実験が行われ、多くの成果が達成されています. 7効果的な治療用ワクチンの製造は、癌予防ワクチンの開発よりもさらに難しいようです。. これらのワクチンは、腫瘍細胞を縮小させ、それらの再生を防止するとともに、癌細胞の増殖を遅延または停止させることを目的としています.グルカル シリアルコード 使い方3 癌は世界的に心臓病に次いで2番目に主要な死因であり、そして人の生命に対する致命的な脅威と考えられており、50%以上の症例で死の可能性がある。. ほとんどの癌はその発生の初期段階で臨床的症状を示さないので、治療が実質的に不可能になるとき、それらが転移性になるまで診断は非常に困難または不可能である。. したがって、微小微小転移細胞に対する強力な抗体を産生するための癌に対するワクチンの開発は、癌の発生の可能性を減らすことができます. 1,2 近年、先進国における抗癌性複合糖質ワクチンの製造および評価のための多くの実験が行われてきており、そしてGlobo H誘導体を用いて多くの成果が達成されている。. 現在の実験では、(Globo H)3 - ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA) - KLH抗原の新しい化学的に設計された三重バージョンが合成され、特徴付けられました。. DTPAおよびKLHタンパク質とコンジュゲートした様々な種類の癌で高度に発現される抗原性炭水化物のファミリーのメンバーである六糖である(Globo H)3-DTPA-KLHによる免疫化は、高レベルの抗体価を誘導した。マウスにおけるIL-4濃度の上昇. 免疫したマウスから採取した血清で腫瘍を治療すると、同様にヌードマウスの腫瘍サイズが減少した. 対照動物と比較して、MCF-7細胞の注射後に免疫化マウスのいずれも腫瘍増殖の徴候を示さなかった。. Globo H抗原の新たに提示された構造に基づくこれらの知見は、将来の治療用ワクチンの開発における臨床的進歩のためのエキサイティングで有望な証拠を与える. Zhuら23はMCF-7細胞の溶解とともにGlobo-KLHに対するIgGおよびIgMレベルを上昇させるために免疫系を刺激することができた。. これまでに、Globo-KLHワクチンのいくつかの誘導体が誘導および評価されています. すべての場合において、Globoの単一の多糖鎖のみが使用されているが、癌細胞表面上のGloboの外観は三本鎖である。. 最も最近提案された抗癌ワクチンの1つは、女性で最も一般的な癌である乳癌に対するワクチンです。. GloboをKLHタンパク質とコンジュゲートして、乳がんに対する体液性免疫システムに抗がん作用を示す可能性のある複合体を提供することができます。. 22 多糖類を結合させて抗癌ワクチンを製造するために提案されているタンパク質の1つは、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)タンパク質である。.グルカル シリアルコード あいことば21 KLHは、大型のマルチサブユニットの酸素運搬金属タンパク質で、巨大な鍵穴リンペットの血リンパに含まれています - Megathura crenulata. これらの知見は、多糖類は免疫を誘発する可能性があるが、免疫系によって認識され免疫を提供するために結合体化される必要があることを示している. インフルエンザ菌B型の標的集団である2歳未満の小児では、破傷風毒素などの別のタンパク質と結合させる必要があるのに対し、ポリリボシルリビトールホスフェート(PRP)による免疫は2歳以上の小児に免疫を誘導する。 PRP-Tワクチンの製造. 20したがって、癌に対する効果的なワクチン接種はおそらく、腫瘍細胞に対する強い免疫と体内でのそれらの確立を提供するために腫瘍特異的複合糖質を必要とする. 9 腫瘍の重症度を軽減するために、腫瘍細胞表面の炭水化物抗原に対する抗体の産生を調べるために、いくつかの前臨床試験が実施されています. 10,11多くの臨床実験は、モノクローナル抗体を処方することが臨床的に有効であることを示しました. 細胞表面の抗原、特に炭水化物抗原に対する自然放出抗体は、さまざまな臨床段階における新しい癌治療法の開発と密接な関係を持っています. これまでのところ、多糖複合体に対する免疫は効果的であるが、多糖単独に対する免疫は効果的ではないことを様々な研究が示している。. 17〜19歳 免疫系が癌細胞に反応するのに理想的な時期は、癌細胞の残骸を同定し殺すために抗癌ワクチンが免疫系を訓練することができる手術および化学療法期間の直後の時間であり得ることが示唆されている。. 6腫瘍細胞を血液やリンパ系から除外し、微小転移細胞を殺すのに十分な抗体価が抗原に対して生じると、癌患者の治癒方法に顕著な変化が現れるでしょう。. 通常、免疫系は癌細胞を体内の正常な細胞と見なし、それらを危険または異物と見なしません。. 癌細胞は、それらが隠れるのを助ける正常な自己抗原を運んでいるだけでなく、免疫系によって認識された後でさえそれらが逃げることを可能にする活性化された抗癌免疫応答を抑制し得る. 5最近の研究は、炭水化物が腫瘍悪性腫瘍を引き起こすことにおいて明白で否定できない役割を持つことを示しました.グルカル シリアルコード ツイッター腫瘍細胞表面の炭水化物は通常、糖タンパク質、粘液分泌物、およびスフィンゴ糖脂質として存在する. 彼らの調査結果は、癌性因子および最終的には癌に対する推定免疫および免疫応答を示した. 6近年、抗がん複合糖質ワクチンの製造と評価のために多くの実験が行われ、多くの成果が達成されています. 7効果的な治療用ワクチンの製造は、癌予防ワクチンの開発よりもさらに難しいようです。. これらのワクチンは、腫瘍細胞を縮小させ、それらの再生を防止するとともに、癌細胞の増殖を遅延または停止させることを目的としています. 3 癌は世界的に心臓病に次いで2番目に主要な死因であり、そして人の生命に対する致命的な脅威と考えられており、50%以上の症例で死の可能性がある。. ほとんどの癌はその発生の初期段階で臨床的症状を示さないので、治療が実質的に不可能になるとき、それらが転移性になるまで診断は非常に困難または不可能である。. したがって、微小微小転移細胞に対する強力な抗体を産生するための癌に対するワクチンの開発は、癌の発生の可能性を減らすことができます. 1,2 すべての動物プロトコルは、イランのパスツール協会による動物実験プロトコルレビュー委員会によってレビューおよび承認された。. 特に記載がない限り、すべての化学薬品はカナダのSigma-Aldrichから購入した。. 40匹のメスCB6F1マウスをイランのパスツール研究所のアニマルケア施設から購入した。. CB6F1ハイブリッドマウスは、雌BALB / c(H-2d)マウスとC57BL / 6(B6; H-2b)マウスの交配のF子孫結果です。. 次いで、3つのイミダゾール結晶を加え、そして混合物を30分間撹拌し、続いて1gを加えた。. 真空下で溶媒を蒸発させた後、残留物を200mLの塩化物および100mLの蒸留水と混合した。.グルカル シリアルコード ログイン有機層を分離した後、それを100mLの水で洗浄し、濾過し、乾燥し、そして真空下でNaSO 4を使用して濃縮した。. 次いで残渣を15%EtOAc:ヘキサン混合物を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の化合物を透明シロップの形態で得た。. シロップ(22mg)を5mLの塩化メチレンと混合し、続いて30mLのジメチルジオキシラン(Robertらによって説明されているように同じ日に調製した)を0℃でゆっくり滴下した。. 次いで混合物を0℃で1時間撹拌し、薄層クロマトグラフィーにより分析して化合物の完全な膨張を確認した。. 6gの3−6−ジ−O−ベンジル−d−グルカール溶液を添加し、混合物を2×5mLのベンゼンと再度共沸させ、真空下で濃縮し、そして減圧下で乾燥させた。. 次いで混合物を10mLのNaHCO 3(1M)溶液に加え、EtOAc(3×20mL)で抽出した。. 抽出した有機化合物を次いで濾過し、濃縮し、Na 2 SO 4で乾燥し、そしてカラムクロマトグラフィー(勾配溶出、10%〜25%のEtOAc:ヘキサン)により精製した。. 全混合物含有量を後に70mLの冷蒸留水に移し、EtOAcで希釈し、70mLの蒸留水で2回そして70mLの塩水で1回洗浄し、濾過し、NaSO 4で乾燥し、続いて10%を用いて原料のカラムクロマトグラフィーを行った。ヘキサン中の12%EtOAcで所望の化合物(2を得る). フッ化物含有化合物の合成4,6-ジ-O-ベンジル-3-O-(4-メトキシベンジル)-d-グルカール(7)の混合物. 乾燥CHCl 3(10mL)中の20g)溶液をジメチルジオキシラン(0%)で処理した。. ヘキサン中の30%EtOAcを含有する薄層クロマトグラフィーを使用して全体グルカールが膨張するまで混合物を撹拌した。. 次いで残渣を0℃でN 2圧力下で乾燥THF(30mL)に溶解し、続いて36mLのTBAF(モレキュラーシーブ上で保存)で処理し、室温で20時間撹拌した。. 暗褐色溶液をシリカパッド(〜4cm深さ)を通して濾過し、200mLのEtOAcで洗浄し、続いて200mLの蒸留水で2回洗浄し、そしてMgSO 4で乾燥した。. 次いで残渣をヘキサン中の30%EtOAc(50mL)に溶解し、シリカバー(直径10cm、長さ4cm)を通して濾過し、そして同じ溶媒1Lで再度洗浄した。.グルカル シリアルコード 読み方次に残渣を0℃でN 2圧下に乾燥DMF(30mL)に溶解し、BnBr(1)で処理した。. 塩基性アルミナを通して濾過し、そして最後に0℃で30分間撹拌し、続いてNaOH(1リットル)と共に室温で30分間撹拌した。. 混合物を100gの氷に注いだ後に反応を停止させ、混合物を1:1のEtOAc−ヘキサン(2×150mL)で抽出した。. ヘキサン中の10%EtOAcを使用してカラムクロマトグラフィーを実施し、それにより2g(49%)の所望の化合物を淡黄色の液体の形態で得た()。. 5当量、679mg)をエーテル中で合成し、濃縮し、真空中で2時間乾燥し、ジ-tert-ブチルピリジン(1)で処理した。. 別の25mLフラスコに、2Åの4Åモレキュラーシーブスを添加し、そして真空下で加熱により乾燥させ、そして室温に冷却した。. 塩混合物を水浴中に置き、そして二重針を用いて糖溶液を塩に添加し、そして室温で48時間撹拌した。. 混合物をエーテルで希釈し、シリカパッドを通して濾過し、続いてエーテルで洗浄した。. 濾液(70mL)を50mLの重炭酸ナトリウム溶液で2回希釈し、そしてNa 2 SO 4下で乾燥した。. ヘキサン中の20%EtOAcを用いてカラムクロマトグラフィーを2回行い、54%の純度を有する561mgの三糖を得た。. 14mmol)を加え、0℃で20分間インキュベートした後、窒素流を用いて濃縮した。. それを次いで60mLのTHFに溶解し、-78℃に冷却し、続いて3mLを加えた。. 合わせた有機相を300mLの塩水で洗浄し、MgSOで乾燥させ、粗生成物をヘキサン中の20%EtOAcを使用するカラムクロマトグラフィーで精製した. 次いで残渣を20mLのTHFに溶解し、2,6-ジ-tert-ブチルピリジン(11)で処理した。. 混合物を4℃で40mLのNaHCO 3飽和溶液で処理した後、混合物を300mLのEtOAcで2回抽出した。. 次いで有機層の内容物を200mLの塩水で洗浄し、そしてMgSO 4で乾燥した。.グルカル シリアルコード ルギア55mmol、87mg)をCHで1回脱共沸し、1時間高真空で乾燥し、次いで5mLのTHFに溶解し、次いで870mgの新たに活性化した4Åモレキュラーシーブ(250℃のオーブンで4時間加熱して得た)。追加されました. 褐色のヨウ素が消失し、そしてI(sym − coll)ClOが得られるまで、室温で1mLのTHF中の22mmol)に溶解した。. 次にそれを、5℃でグリコール酸三糖およびベンゼンスルホンアミドを含むフラスコに加えた。. 濾過し、EtOAc(80mL)で抽出した後、有機層を20mLの重水素除去水で洗浄し、20mLのCuSO 4で飽和させ、MgSO 4で乾燥し、シリカゲル(ヘキサン中20%EtOAc)を用いるカラムクロマトグラフィーで精製した。結果として74 mgのヨードスルホンアミドを得る. N 2流下でEtO − CHCl 3(2:1)に懸濁した077mmol、92mg)、チオグリコシド(2当量、198mg)、および活性化モレキュラーシーブ(560mg)を室温で10分間撹拌した。. 濾液(70mL)を2×50mLの飽和NaHCO 3溶液で再度洗浄し、Na 2 SO 4で乾燥させ、MICROSORB Semi - prep Si 80-120 - C5カラム(Bio - Rad)を用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって精製した。 15mL /分の流速および260nmの光学密度のヘキサン中の17%EtOAc、158mg(純度85%)の所望の生成物を得る。. 六糖グリカールおよび新たに活性化した4Åモレキュラーシーブの混合物を1mLのジメチルジオキシラン(0mL)で処理した。. 窒素気流下0℃で1mLのCHCl 3中07M)に溶解し、残渣を高真空下で20分間乾燥させた。. 次いで、アジドヒドリン溶液をTHF(0℃)中の容器を通してエポキシドに添加した。. 次に、EtO中のZnCl(1M、25μL)を加え、混合物を室温に冷却させ、次いで次の12時間撹拌した. 次に、混合物をEtOAc(50 mL)で希釈し、NaHCO飽和溶液(2 x 20 mL)および塩水(10 mL)で洗浄し、Na SOで乾燥し、そして原料をカラムクロマトグラフィー(10%-22)で精製した31%を得るためのヘキサン中の10%EtOAc).グルカル シリアルコード ルール溶媒を蒸発させた後、残渣をEtOAc(30mL)で希釈し、NaHCO 3希釈溶液(285mL)および塩水で洗浄し、Na 2 SO 4で乾燥した。. 原料のカラムクロマトグラフィー(20%EtOAcのヘキサン溶液)は、30mg(95%)の所望の生成物を提供した()。. (Globo)−DTPA − KLHAの最終生成物の合成約1mmolのKLH(3g)を2mmolのS − 2−(4−イソチオシアナトベンジル) - ジエチレントリアミン五酢酸(p − SCN − Bn − DTPA)中で混合した。リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で24時間撹拌した。. 次いで、無水DMFが形成されるまで、40℃で3時間撹拌しながら、残りのものを10mLの溶解DMF、無水酢酸(CHO)、および10mgのピリジンを含有する混合物に添加した。. 次いで、10mgの1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド+ 2mLのトリエチルアミンを混合物に加え、内容物を2時間氷上に置き、その後室温に保った。. 最終生成物の立体配座は、1 H核磁気共鳴(NMR)、フーリエ変換赤外法、およびHPLC法を用いて後で決定された。. マウスを8つの5つのグループに分け、そして腹腔内注射により200μLで異なるワクチンレジメンを受けた。. 第1群には(Globo)−DTPA − KLH、第2群には(Globo)−DTPA − KLH +アジュバントを投与し、第3群には陰性対照としてDTPA − KLHを投与し、第4群にはDTPA − KLH +アジュバントを投与し、そして第5群にはDTPA − KLHアジュバントを投与した。 PBS単独. 血液を伏在静脈からエッペンドルフチューブに集め、1500rpmで15分間遠心分離した。.マウス血清中の抗体レベルは酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)を用いて検出した。. 25μg/ウェルのウシ血清アルブミンまたはGlobo-DTPA-アルブミン結合体を別々に一晩インキュベートした. 各群のマウスからポーリング血清(1:50、1:100、1:300、1:900、1:2,700、および1:8,100)の段階希釈物を調製し、ウェルに添加し、そして37℃でインキュベートした。 1時間C. 1:1,000の濃度で西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたウサギ抗マウス抗体を用いて抗体を検出し、37℃で1時間インキュベートした。. 次いでプレートを3回洗浄し、100μLのTMBを各ウェルに添加し、そして暗所で15分間インキュベートした。. グルカル シリアルコード ルール各ウェルに対して5Mの硫酸、およびBio − Rad ELISAリーダーを用いて450nmの波長で光強度を読み取った。. 免疫マウスから採取した血清中のサイトカインを検出するために、それぞれab100710-IL-4(IL-4)とab46081-IFNγマウスELISAキット(Abcam、Cambridge、MA、USA)を用いてIL-4とIFNγの両方を検出しました。. 免疫したマウスの血清中の抗体の抗腫瘍効果を調べるために、腫瘍を4つのヌードマウス(イランのパスツール研究所から購入)の2つの群に発生させ、20×10 6 MCF − 7細胞をマウスの右肢に注射した。各マウス. 腫瘍サイズが約1cmに達した後、ワクチン接種マウスまたは対照群のいずれかからの200μLのプールされた血清を各ヌードマウスの腫瘍部位の周囲に皮下注射した。.
0 Comments
Leave a Reply. |
AuthorWrite something about yourself. No need to be fancy, just an overview. Archives
June 2019
Categories |